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Panbio登革熱IgM 捕獲ELISA法

Panbio登革熱IgM 捕獲ELISA法

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Panbio登革熱IgM 捕獲ELISA法是一種定量檢測血清中登革熱IgM抗體的方法,可以作為臨床具有登革熱症狀病人的臨床實驗室檢測輔助手段。

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Panbio登革熱IgM 捕獲ELISA法

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Panbio登革熱IgM 捕獲ELISA法 原理:IgM群血清抗體和粘附在微孔測試板聚笨乙烯表麵上的抗人IgM抗體相結合。用抗原稀釋液把登革熱1~4號抗原濃縮液稀釋到恰當的工作容量。抗原由昆蟲細胞表達係統和一種免疫純化的單克隆抗體製得而成。在稀釋抗原中加入適量的辣根過氧化物酶(HRP)結合單克隆抗體(MAb)形成抗原-MAb複合物。洗去測試板內的殘存血清,加入抗原-MAb複合物。孵育後,洗滌微孔板,加入無色底物,四甲基聯苯胺/過氧化氫(TMB/H2O2)。底物被酶水解後變成藍色。加酸終止反應後,TMB變成黃色。顏色的變化表明測試樣本中有抗登革熱IgM抗體。

用於體外診斷用

(i) 用在準備對照時的所有人類來源的材料在測試對人類缺陷性病毒1和2(HIV1和2)、丙型肝炎病毒以及乙型肝炎病毒表麵抗原抗體時,都為陰性。但是沒有哪種方法能夠完全保證,所以所有的人體對照和抗原都應該認為是潛在的感染源。疾病預防控製中心和國家健康署建議可能傳染的抗原應該在2級生物安全下進行處理。

(ii) 這種測試隻能用血清。用全血、血漿或是其它的樣本間質不能做。

(iii) 黃疸的或黃體脂蛋白血清,或表現出溶血的,或有細菌生長的血清都不可用。

(iv) 不要加熱失活的血清。

(v) 在開始實驗前,所有的試劑必須要平衡至室溫(20~25ºC)。試驗受到室溫變化的影響。隻有達到了室溫才能把微孔板從密封包裏拿出來。

(vi) 用幹淨的槍頭直接在瓶子裏配試劑。轉移試劑可能會導致汙染。

(vii) 未用過的微孔板,應立即重新封存,並儲存有幹燥劑的地方。如果不這樣做可能會造成錯誤的結果。

(viii) 底物係統

(a) 由於TMB易受金屬離子汙染影響,所以不允許底物係統和金屬表麵接觸。

(b) 避免長時間暴露於陽光直射下。

(c) 一些洗滌劑可能會幹擾TMB的表現。

(d) TMB可能會有一些淡藍色。這個不會影響底物的活性或者試驗的結果。

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